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叶酸修饰后PAMAM介导反义寡聚核苷酸抑制C6鼠脑胶质瘤细胞生长的体内外研究  
叶酸修饰后PAMAM介导反义寡聚核苷酸抑制C6鼠脑胶质瘤细胞生长的体内外研究
资料类型: PDF文件
关键词: 树枝状大分子  叶酸  靶向  反义寡核苷酸  基因治疗  转染  胶质瘤  
资料大小: 949K
所属学科: 分子表征
来源: 2007年全国高分子学术论文报告会(10.9-10.13,成都)
简介:
目的评价叶酸改性的PAMAM-dendrimer树枝状大分子(FA-PAMAM-D)作为反义EGFR寡核苷酸治疗鼠恶性脑胶质瘤细胞的可行性及优化方案。方法应用吸附法将PAMAM-D与反义EGFR寡核苷酸(AntisenseOligonucleotide,ASODN)按照不同N/P比值结合后应用电泳结合实验筛选最佳结合比值,采用不同的转染剂FA-PAMAM-D、PAMAM-D、oligofectamine将相同剂量的荧光标记的ASODN和SEODN转染至鼠恶性脑胶质瘤体外细胞系C6,流式细胞仪测定各转染剂的转染率,RT-PCR、MTT、细胞周期、Western法进行转染前后C6细胞生长体外评价,并应用三组不同的载体治疗系统进行叶酸修饰后PAMAM介导反义寡聚核苷酸抑制C6鼠脑胶质瘤细胞生长的体内外研究。结果⑴电泳结合实验显示N/P为电荷比(N/P)大于16:1时ODN才能与PAMAM完全结合。⑵流式细胞仪检测结果显示FA-PAMAM-D的转染率为97.36%,为商业化转染剂oligofectamine的两倍。⑶RT-PCR、Western结果显示转染入靶向EGFR的ASODN的C6细胞的EGFR表达明显下调;细胞周期的结果显示转染ASODN的细胞S期比例显著降低,细胞被阻滞于G0/G1期;MTT法分析结果表明ASODN作用时间仅为四天;所有上述细胞生长体外评价结果中均显示FA-PAMAM-D为转染剂的分组抑制率明显高于其他分组。三组不同的载体治疗系统Oligofectamin/ASODN基因治疗组、PAMAM/ASODN基因治疗组、FA-PAMAM/ASODN基因治疗组治疗C6荷瘤鼠后,大鼠生存期较对照组有明显的延长,且FA-PAMAM/ASODN组的生存时间最长。MRI检测结果显示基因治疗一周时FA-PAMAM/ASODN组的肿瘤大小无增长。结论FA-PAMAM-D作为一种载体材料,能显著的提高基因的转染率,使得治疗基因最大程度下调目的基因的表达,是一种良好的靶向基因投递载体材料。
作者: 康春生 李菲 张安玲 原续波 浦佩玉 王广秀 盛京
上传时间: 2007-11-21 17:15:26
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