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浙江大学高长有教授团队 Biomaterials:活性氧响应微凝胶上调Treg治疗心肌梗死的研究
2024-03-28  来源:高分子科技

  急性缺血导致的心肌梗死(MI),会引起爆发性炎症反应,进而导致大量心肌细胞的凋亡,长期会引发心脏衰竭。炎症病理环境中的高表达活性氧(ROS)分子为自适应材料的设计提供了理论依据ROS响应材料可以消耗过高的ROS同时释放包载的功能物质,进而降低ROS水平;降低的ROS水平会减慢材料的分解速度及功能物质释放速度,形成反馈调节的自适应性治疗体系另一方面,免疫细胞调控为大多数炎症疾病提供了普适的解决方法,且调节性T细胞(Treg)疗法被视为治疗炎症性疾病的理想工具。然而,目前Treg疗法面临着Treg数量不足和特异性较低的挑战。为此,浙江大学高长有教授团队采用同轴毛细管微流控系统和紫外光固化技术制备了一种活性氧(ROS)响应释药的微凝胶体系(MTK-TK-drug,用于上调心梗部位的Treg含量,提高心梗的治疗效果


  作者首先合成了ROS响应交联剂(PEG-TK-PEG)、含有氨基氧乙酸(AOA,促进Th17Treg转化)ROS响应释放前药(PEG-TK-AOA和含有脲基嘧啶酮(UPy)的氢键交联剂(PEG-UPy)。将PEG-TK-PEGPEG-TK-AOAPEG-UPy与苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰膦酸锂(LAP)光引发剂混合在水溶液混合,经同轴毛细管微流控系统和紫外光固化形成MTK-TK-drug微凝胶。该微凝胶体系可以通过响应MI中高表达的ROS,实现AOA的原位释放,进而在体内外上调Treg含量、提高MI的治疗效果(图1


1.PEG-TK-AOAPEG-TK-PEGPEG-UPy化合物制备的ROS响应释药微凝胶体系(MTK-TK-drug)治疗心肌梗死过程。在ROS水平升高的心肌梗死微环境中,TK键断裂释放AOA,降低ROS水平,抑制细胞凋亡,上调Treg,减轻炎症,促进新生血管形成,恢复心功能

  与PBS组相比,经脂多糖(LPS)和干扰素(IFN-γ)刺激的RAW264.7巨噬细胞可显著提高细胞上清液中的肿瘤坏死因子(TNF-α(图2A)和白介素(IL-6(图2B)因子的表达。经过MPEG(惰性微凝胶)MTKROS响应微凝胶)MTK-PEG-drugROS响应微凝胶+不释放AOAMTK-TK-drugROS响应微凝胶+ROS响应释放AOA微凝胶处理后,炎症因子的表达均有不同程度的降低。其中,实验组MTK-TK-drug微凝胶的效果明显强于其他组。显然,微凝胶的ROS清除特性与ROS刺激下的AOA释放可以更好地调控炎症微环境,为稳定Treg表型奠定了基础。在Th17分化培养条件下评价微凝胶对T细胞的影响。通过流式细胞仪,分析了不同条件处理后na?ve CD4+T细胞中Th17Treg的表达(图2C, D)。其中,MTK-TK-drug微凝胶组IL-17+T细胞水平较低,而Foxp3+T细胞水平较高,仅次于Treg组(图2E, FIL-17+T/Foxp3+T细胞的比例较小,与Treg接近(图2G)。Western blot分析得到了相同的结果(图2H)。这些发现表明活性氧响应释放AOA的微凝胶在Th17分化培养条件下能有效抑制T细胞向Th17分化,促进Treg分化。


2.微凝胶对巨噬细胞和T细胞的调控作用。经LPSIFN-γ刺激后的RAW264.7细胞经过MPEGMTKMTK-PEG-drugMTK-TK-drug微凝胶处理后,细胞上清中(ATNF-α和(BIL-6的水平变化。(Cna?ve CD4+T细胞磁分选提取过程。(D)不同条件处理后na?ve CD4+T细胞的IL-17AFoxp3的表达,以及(EIL-17+T细胞百分比、(FFoxp3+T细胞百分比、(GIL-17+T细胞与Foxp3T细胞比例。(H)不同条件处理后na?ve CD4+T细胞IL-17AFoxp3蛋白的表达情况。


  从大鼠心肌梗死的长期治疗效果上看,MTK-TK-drug能够有效防止大鼠心梗后心室扩张、减少心肌纤维化,维持心功能(图3。心肌梗死的体内治疗表明,MTK-TK-drug微凝胶可显著减少心肌细胞凋亡、降低炎症反应。微凝胶通过将促炎Th17有效转化为抗炎Treg,降低了炎症反应并促进组织愈合。该微凝胶系统也可望用于其他类似炎症性疾病的治疗


3.微凝胶长期治疗效果。(A)左心室及代表性超声心动图图像。(B)大鼠心脏马松三色染色切片总览图(上图)和放大视图(红色框标记区域;下图)。(C)左室射血分数(LVEF)(D)左室缩短分数(LVFS)(E)左室舒张末期容积(LVEDV)(F)左室收缩末期容积(LVESV)(G)心肌梗死区定量分析,(H)左心室梗死区室壁厚度。


  该工作以“ROS-responsive drug-releasing injectable microgels for ameliorating myocardial infarction”为题发表在《Biomaterials》上文章第一作者是浙江大学王淑琴博士和姚跃君博士,通讯作者是朱旸研究员、刘文星副研究员和高长有教授。该研究得到国家自然科学基金等项目支持。


  原文链接:https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0142961224000681

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(责任编辑:xu)
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