近年来，免疫治疗作为一种新的治疗策略得到迅速的发展。其中部分化疗药物（如紫杉醇、阿霉素或奥沙利铂）通过诱导肿瘤细胞发生免疫原性死亡（ICD），释放肿瘤抗原和危险相关分子模式激活抗原，产生抗原特异性的免疫反应。尽管如此，由于高剂量的化疗药物存在药物副作用大、治疗效果差和易被内皮网状系统清除等缺陷，肿瘤免疫微环境（TME）参与了免疫抑制的不同机制来逃避免疫监视，单用化疗产生的免疫调节效应仍难以产生强烈的抗肿瘤免疫反应。因此，开发一种有效协同调节多种免疫细胞的纳米药物以增强抗癌免疫治疗至关重要。

  以NK细胞为基础的免疫疗法具有明显的优势，如细胞识别时不受抗原特异性控制同时充当免疫系统的调节细胞，释放穿孔素和颗粒酶等杀死异常细胞来调节先天性和获得性免疫反应。此外，米托蒽酮、DOX、顺铂等化疗药物在增强NK细胞的敏感性和提高其细胞毒性方面具有一定的潜力。例如，DOX已被证明能够通过上调肿瘤细胞中的TRAIL受体和下调细胞内的FLICE抑制蛋白来增强NK细胞的靶向性，并促进由Caspase-8裂解触发的凋亡信号。

  在众多的纳米载体体系中，含磷树状大分子和PAMAM树状大分子具有显著的不同之处，具有分子量均一、较强的刚性结构、自身的药物活性等特性。例如，含磷树状大分子与金属络合物可以用于抗肿瘤治疗应用，修饰磷酯酸钠盐的含磷树状大分子可以抑制外周血单核细胞（PBMC）中调节性T细胞（Tregs）的扩增并调节单核细胞和NK细胞之间的复杂信号诱导NK细胞增殖用于肿瘤的治疗。

  由于含磷树状大分子具有的刚性结构使其难以物理封装化疗药物，两亲性含磷树冠大分子的发展解决了这一难题，可通过在水溶液中自组装形成胶束用于封装药物。考虑到复杂的肿瘤微环境仍然是免疫细胞发挥有效抗肿瘤细胞活性的主要障碍，而针对PD-1/PD-L1的“免疫检查点阻断”（ICB）疗法可通过抑制肿瘤细胞表面PD-L1的表达逆转CD8+ T和NK细胞的衰竭，从而解除免疫抑制，恢复抗肿瘤免疫。因此，基于磷酯酸钠盐含磷树冠大分子的免疫调节活性，并联合肿瘤ICD和ICB疗法有望重塑肿瘤免疫微环境并产生抗肿瘤免疫记忆效应。 

图1. M-G1-TBPNa@DOX的合成及应用示意图。

图2.（A）M-G1-TBPNa和（B）M-G1-TBPNa@DOX的TEM图；（C）M-G1-TBPN和（D）M-G1-TBPNa@DOX的AFM图；各材料的水合粒径（E），电势（F）及紫外吸收曲线（G）；（H）M-G1-TBPNa@DOX在水、PBS以及培养基中的粒径变化曲线。

图4.（A）B16细胞与不同材料处理后的PBMCs共孵育的示意图；不同材料处理下PBMCs中（B-C）NK细胞的比例分析，（D）IFN-γ的含量，（E）穿孔素的表达及（F）颗粒酶B的表达情况分析；B16细胞与不同材料处理后的PBMCs共孵育后，B16细胞的（G）细胞凋亡结果，（H）相关凋亡蛋白的Western blot试验结果图及（I）caspase-3的表达情况。对于（B-I）：Ⅰ，PBS；Ⅱ，IL-2；Ⅲ，IL-2+M-G1-TBPNa；Ⅳ，IL-2+M-G1-TBPNa@DOX。

图5.（A）小鼠肿瘤部位CRT的分布；（B-C）淋巴结的树突细胞熟化情况结果分析图；血清中（D）IL-6、（E）IL-12p70、（F）TNF-α的表达水平；（G-I）肿瘤部位CD4+和CD8+T细胞的分布情况；（J）CD8+/CD4+ T细胞的比例；（K）肿瘤部位Tregs的表达水平分析；（L）CD8+T细胞与Tregs的比值。

  随后，研究团队进一步评估了M-G1-TBPNa@DOX+aPD-L1的联合疗法在体内产生的长期免疫记忆效应，在联合治疗的基础上进行了抗肿瘤转移实验（图6A）。研究发现联合治疗使小鼠脾脏和淋巴结中的记忆T细胞含量显著增加（图6B-F），并且抑制了肿瘤的肺转移情况（图6G-I）。 

图6.（A）小鼠体内抗肿瘤转移实验示意图。（B）脾脏部位、（C）淋巴结部位的记忆T细胞比例分析。（D）脾脏部位中央记忆T细胞和（E）效应记忆T细胞比例分析；（F）IFN-γ的表达情况；（G-I）各组小鼠经治疗后抗肿瘤转移实验结果。

  简而言之，该研究设计的M-G1-TBPNa@DOX纳米药物具有以下优势：1）构建的纳米药物胶束显著提高了DOX的生物利用度并降低了其副作用，DOX介导的化疗作用促进了肿瘤细胞凋亡，诱导肿瘤细胞发生ICD，激活免疫系统；2）纳米胶束固有的免疫调节活性促使PBMCs中的NK细胞增殖，通过血液循环作用被招募到肿瘤部位，协同其余免疫细胞发挥抗肿瘤功能；3）M-G1-TBPNa@DOX与aPD-L1的联合治疗有效产生长期免疫应答并抑制肿瘤转移。本研究制备的M-G1-TBPNa@DOX为协同调节多种免疫细胞以实现增强的抗肿瘤化学免疫治疗提供了新思路。

  文章链接：https://doi.org/10.1002/adma.202208277